很多科研人員在血清解凍后會(huì)發(fā)現(xiàn)渾濁及絮狀物質(zhì),這時(shí)候大家難免會(huì)擔(dān)心:這血清是不是污染了，還能用嗎?帶著這個(gè)疑惑，繼續(xù)往下看........

血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體，是血漿去除纖維蛋白后的混合物，主要成分包括蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、維生素和多肽（如生長(zhǎng)因子、胰島素、促生長(zhǎng)激素）等。血清是細(xì)胞培養(yǎng)過程中重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)也對(duì)細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。

一、常見的幾種血清沉淀物

二、血清中的沉淀是什么？

用于細(xì)胞培養(yǎng)的各種血清產(chǎn)品中都存在各種類型的沉淀。除了膽固醇和一些蛋白沉淀之外，血清中也會(huì)含有纖維蛋白和磷酸鈣。雖然沉淀可引起初始問題，但在細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用方面，沉淀一般不會(huì)對(duì)血清的性能產(chǎn)生影響。

1、纖維蛋白

血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中,血清采集、過濾(3次0.1 um過濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成，此時(shí)血清中纖維蛋白原處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后，血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集形成肉眼可見的沉淀。

2、磷酸鈣

常見的一種沉淀物，會(huì)造成血清渾濁,并且在37℃C培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn),并且由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去像在活動(dòng),因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。

3、其他成分

血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀,例如膽固醇和其他蛋白沉淀等。

三、血清沉淀是污染嗎？

無論是較大的絮狀纖維蛋白還是小黑點(diǎn)樣的磷酸鈣，都容易被誤認(rèn)為是細(xì)菌污染，但其實(shí)血清沉淀并不是污染。由于在37℃的溫度下培養(yǎng)，會(huì)加劇纖維蛋白的析出和磷酸鈣顆粒產(chǎn)生，可采用空培方式驗(yàn)證污染，血清按所需比例加入無菌培養(yǎng)基中（不加雙抗），放培養(yǎng)箱中過夜，觀察空培外觀，若為澄清，則血清無污染。還可以通過將血清接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否存在細(xì)菌增殖，并且進(jìn)行革蘭氏染色，用油鏡觀察直接判斷是否為微生物污染。

三、血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)嗎？

血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，各品牌的血清均有沉淀的出現(xiàn)，過于澄清的血清并不代表更高的品質(zhì)，也可能是在加工過程中提前進(jìn)行“預(yù)老化"，即反復(fù)凍融盡可能的去除纖維蛋白原的結(jié)果。

血清沉淀的多少與血清的使用效果沒有必然關(guān)系，血清沉淀并不會(huì)影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。

四、如何避免過多沉淀出現(xiàn)?

正確的使用和保存血清是避免沉淀產(chǎn)生的關(guān)鍵!

★非必須不用熱滅活(熱滅活會(huì)使血清中部分蛋白質(zhì)變性析出影響血清品質(zhì))

★不宜37℃預(yù)熱,血清和wan全培養(yǎng)基通常室溫預(yù)熱即可

★避免反復(fù)凍融,分裝使用

★避免紫外線照射

★避免2-8℃長(zhǎng)期保存,分裝后-20℃長(zhǎng)期保存,按需融解使用

五、血清的正確解凍方法:

應(yīng)按照逐步解凍的方式解凍血清:從-20°C取出后放置到4℃C融解。在解凍過程中,請(qǐng)注意時(shí)不時(shí)緩慢搖晃瓶子,減少沉淀的產(chǎn)生。注意直接室溫或者水浴融解都容易造成沉淀增多。

注意注意！！！血清融解過程約持續(xù)二十小時(shí)左右,所以記得在試驗(yàn)前提前融解!

五、去除沉淀的方法?

如果血清中含有沉淀，不建議直接過濾血清。若去除這些絮狀沉淀物，可將血清分裝至無菌離心管中，以400g離心5min，去除大顆粒沉淀，上清液加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。

六、總結(jié):

綜上所述，在我們培養(yǎng)細(xì)胞的過程中，血清出現(xiàn)沉淀是正常情況，無論是較大的絮狀纖維蛋白還是小黑點(diǎn)樣的磷酸鈣，都不是污染，且沉淀不會(huì)影響細(xì)胞的培養(yǎng)效果，可以放心使用。