貓腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒

規(guī)格：96T/48T

英文：Cat Brain-derived neurotrophic factor,BDNF ELISA Kit

Elisa試劑盒原理

Elisa的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，樣品中的受檢物質(zhì)（抗原或抗體）與固定的抗體或抗原結(jié)合。通過(guò)洗板除去非結(jié)合物，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，此時(shí)，能固定下來(lái)的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過(guò)加入與酶反應(yīng)的底物后顯色，根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量，進(jìn)行定性或定量的分析。
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：(1) 固相的抗原或抗體；(2) 酶標(biāo)記的抗原或抗體；(3) 酶作用的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具備條件，有以下幾種常用檢測(cè)方法

雙抗體夾心法測(cè)抗原

雙抗體夾心法是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體，然后和待測(cè)血清中的響應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，洗滌后加酶標(biāo)記抗體，與免疫復(fù)合物中的抗原結(jié)合形成酶標(biāo)抗體-抗原-固相抗體復(fù)合物，加底物顯色，判斷抗原的含量。

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競(jìng)爭(zhēng)法

首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測(cè)定的未知抗原的量。此方法測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可，對(duì)小分子抗原如激素和藥物類的測(cè)定常用此法。

直接法

在直接Elisa中，抗原通過(guò)被動(dòng)吸附直接固定在板的表面，并使用HRP標(biāo)記的一抗進(jìn)行檢測(cè)。將無(wú)色底物引入樣品，該底物與酶結(jié)合物反應(yīng)，并產(chǎn)生可測(cè)量的副產(chǎn)物。根據(jù)底物的選擇，該副產(chǎn)物可以是比色的，化學(xué)發(fā)光的或熒光的。信號(hào)產(chǎn)生的大小與樣品中抗原的數(shù)量成正比。

間接Elisa本質(zhì)上是直接ELISA的修改版本。在間接ELISA中，用于檢測(cè)抗原的一抗是未偶聯(lián)的。取而代之的是，對(duì)一抗的宿主物種具有反應(yīng)性的酶標(biāo)二級(jí)抗體被用于檢測(cè)一抗-抗原復(fù)合物（間接檢測(cè)抗原）。將無(wú)色底物引入樣品，該底物與酶結(jié)合物反應(yīng)，并產(chǎn)生可測(cè)量的副產(chǎn)物。根據(jù)底物的選擇，該副產(chǎn)物可以是比色的，化學(xué)發(fā)光的或熒光的。信號(hào)產(chǎn)生的大小與樣品中抗原的數(shù)量成正比。與直接ELISA相比，使用輔助檢測(cè)試劑具有明顯的優(yōu)勢(shì)，即信號(hào)放大。

Elisa試劑盒的組成

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）;

（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）;

（3）酶的底物;

（4）對(duì)照品（定性測(cè)定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）;

（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;

（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;

（7）酶反應(yīng)終止液。

Elisa試劑盒分類

細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒

心肌梗塞檢測(cè)試劑盒

內(nèi)分泌檢測(cè)試劑盒

肝纖維化檢測(cè)試劑盒

自身免疫檢測(cè)試劑盒

腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑盒

優(yōu)育檢測(cè)試劑盒

傳染病檢測(cè)試劑盒

特種蛋白檢測(cè)試劑盒

樣本處理

1血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

4細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。